Resumo
O gene que codifica o homologo de cutinase, LC-cutinase, foi
clonado a partir de uma biblioteca metagenomica de fosmideos de uma folha-ramo
composto por pesquisa funcional utilizando tributirina em placas de agar.
LC-cutinase mostra a identidade máxima de sequência de aminoácidos de 59,7%
para Thermomonospora curvata lipase,
ela também mostra a identidade de 57,4% para Thermobifida fusca cutinase.
Quando LC-cutinase se encontra sem um suposto peptidio sinal, é
segregado para o periplasma de células de E.
coli, com o auxilio de sequência líder de pelB. Mais do que 50% da proteína
recombinante, denominado LC-cutinase foi excretado para o meio extracelular,
posteriormente foi purificado e caracterizado. LC-cutinase hidrolisa vários
monoésteres de ácidos graxos com comprimentos de cadeia acil de 2 a 18, com uma
preferência para os substratos de cadeia curta (C (4) do substrato no máximo )
mais otimamente a pH 8,5 e 50 ° C , mas não pode hidrolisar azeite de oliva .
Perdeu atividade com meias-vidas de 40 minutos a 70 ° C e 7 minutos a 80 ° C. LC -cutinase tinha uma capacidade de degradar poli ( ε -
caprolactona ) e tereftalato de polietileno ( PET ) . A atividade específica de
degradar PET da LC - cutinase foi determinada como sendo de 12 mg/h/mg de
enzima (2,7 mg /h/μkat de PNP- butirato
de atividade degradante), a pH 8,0 e 50 ° C. Esta atividade é mais
elevada do que as das cutinases bacterianas e fúngicas relatadas até agora , o que
sugere que a LC - cutinase não só serve como um bom modelo para a compreensão
do mecanismo molecular da enzima degradadora de PET , mas é também
potencialmente aplicáveis para a modificação da superfície e da degradação de
PET .
